Antibacterial and hemolytic activity of extracts and compounds obtained from epicarps and seeds of Garcinia madruno(Kunth) Hammel / Actividad antimicrobiana y hemolítica de extractos y compuestos obtenidos del epicarpio y las semillas de Garcinia madruno (Kunth) Hammel

This paper describes the evaluation of the antimicrobial and hemolytic activity of the hexane, dichloromethane, ethyl acetate and methanol extracts from seeds and epicarps of Garcinia madruno; as well garcinol, morelloflavone and volkensiflavone isolated from the same species. In the preliminary test of bacterial susceptibility, hexane extracts from seeds and epicarps and the three compounds tested only displayed inhibitory growth effect against Gram-positive bacteria. The minimum inhibitory concentrations of extract and compounds ranging from 86.6 to 1253.4 µg/mL. The hemolytic activity was assessed; however, except for the methanol extract from seeds, none of the samples studied induced hemolysis. Thus, our results suggest that extracts and compounds from G. madruno have the potential to be used in the control of pathologies associated to Gram-positive bacteria. This is the first report of the antimicrobial and hemolytic activity of extracts of different polarity obtained from seeds and epicarps of this edible species.

El presente artículo describe la evaluación de la actividad antimicrobiana y hemolítica de los extractos de hexano, diclorometano, acetato de etilo y metanol, obtenidos de la semilla y el epicarpio de Garcinia madruno; así como de garcinol, morelloflavona y volkensiflavona; aislados de la misma especie. En el ensayo de susceptibilidad bacteriana, tanto el extracto de hexano obtenido a partir de la semilla y el epicarpio, y los tres compuestos aislados, únicamente mostraron actividad inhibitoria del crecimiento contra bacterias Gram-positivas. La concentración mínima inhibitoria presentó valores entre 86.6 y 1253.4 µg/mL. También se estableció la actividad hemolítica; sin embargo, con excepción del extracto metanólico obtenido a partir de las semillas, ninguna de las muestras evaluadas indujo hemólisis. Por lo tanto, los resultados sugieren que los extractos y compuestos de G. madruno tienen el potencial de ser usados en el control de bacterias Gram-positivas asociadas a diversas patologías. Este es el primer reporte de actividad antimicrobiana y hemolítica de extractos de diferente polaridad obtenidos de las semillas y epicarpios de esta especie comestible.

Exploración estructural de perfiles de actividad antibacteriana y hemolítica de análogos no naturales del péptido antimicrobiano Mastoparán MP-8 / Structural exploration of antibacterial activity and hemolytic profiles of non-natural analogs of the antimicrobial peptide mastoparan MP-8

En este trabajo se reporta el efecto, la modificación puntual y sistemática a nivel del enlace peptídico realizada al péptido Mastoparán MP-8, obteniéndose 27 pseudopéptidos en total. Los resultados permitieron determinar que los pseudopéptidos ψ-38617(INLKALAALAKd-[CH2NH]-RLL), ψ-38629(INLKAd-[CH2NH]-LAALAKRLL) y ψ-38630 (INLK-[CH2NH]-ALAALAKRLL) presentan mejor actividad que el péptido Mastoparán MP-8 frente a las bacterias Gram negativas y conservaron la actividad antibacteriana frente a las bacterias Gram positivas; además, la modificación realizada produjo tres moléculas que abolieron totalmente la actividad hemolítica propia del péptido nativo. Todas las modificaciones realizadas a esta secuencia provocaron un aumento en la estabilidad de las moléculas frente al ataque enzimático.

In this work the relevance of a systematic replacement of peptide-bonds on the Mastoparan MP-8 antimicrobial peptide to afford 27 new pseudopeptide analogues is reported. Results allowed to determine that pseudopeptides ψ-38617 (INLKALAALAKd-[CH2NH]-RLL), ψ-38629(INLKAd-[CH2NH]-LAALAKRLL) and ψ-38630 (INLK-[CH2NH]-ALAALAKRLL), showed an enhanced anti gam-negative bacterial properties, regarding the native Mastoparan MP-8 peptide, but maintaining a comparable activity against gram-positive bacteria. In addition, specific performed modifications on MP-8 sequence led three new molecules that completely abolished the hemolytic activity of the parent MP-8 peptide. All obtained molecules possess a high stability profile when tested against a severe proteolytic attack.

Análisis epidemiológico sobre la incidencia y resolución de las infecciones por el virus del papiloma humano en mujeres sometidas a un estudio de seguimiento retrospectivo / analysis of the incidence and resolution of the infection by the Human Papillomavirus in women undergoing a retrospective follow-up study

Existen pocos estudios longitudinales en Colombia que abarquen población de distintas zonas del país para el entendimiento de la dinámica de la infección del virus del papiloma humano (VPH). Una muestra representativa de 1.433 mujeres provenientes de tres ciudades de Colombia con edades de 18-60 años y visitas cada 6 ± 2 meses durante dos años, fueron sometidas a la prueba de Papanicolau y reacción en cadena de la polimerasa (pcr). Las mujeres presentaron una tasa de incidencia de 2,49 infecciones/1.000 mujeres/día (IC 95%; 2,25-2,75); la tasa de incidencia para lesiones fue de 0,043 lesiones/1.000 mujeres/día (IC 95%; 0,021-0,086), mientras que para la resolución de la infección la tasa fue de 2,47 infecciones resueltas/1.000 mujeres/día (IC 95%; 2,25-2,71). Un subgrupo de mujeres que presentaron lesiones en la primera visita, tuvo una tasa de 3,92 regresiones de lesión/1.000 mujeres/día (IC 95%; 2,97-5,17). De 619 mujeres con infección, el 27% hizo infección persistente y solo el 10% de 55 mujeres con lesión cervical mantuvo esta condición. Las tasas demuestran que fue frecuente la incidencia y la resolución de las infecciones, mientras que el estudio epidemiológico de las lesiones requiere un mayor número de mujeres y una cohorte de mayor duración.

There are few longitudinal studies in Colombia that cover people from different parts of the country to allow understanding the infection dynamics by Human Papilloma Virus (HPV). A representative sample of 1433 women from three Colombian cities aged 18-60 years which were visited every 6 ± 2 months during two years, were submitted to the Papanicolau and reaction Polymerase chain (pcr) tests. Infection incidence was 2.49 /1000 women/day (CI 95%, 2.25-2.75), the incidence rate for lesion was 0.043 lesion/1000 women/day (CI 95%, 0.021-0.086), while for infection clearance the rate was 2.47 infection clearance/1000 women/day (CI 95%, 2.25-2.71). A women´s subgroup who reported having lesions on the first visit, had a rate of 3.92 lesion-regressions/1000 women/day (CI 95%, 2.97-5.17). From a group of 619 women with infection, 27% reported a persistent infection and only 10% of 55 women with cervical lesion kept this condition. Data showed that incidence and infection resolution was frequent, while the epidemiological study of lesions would require a greater number of women and a cohort of longer duration.

Estudio fitoquímico de hojas de Uncaria guianensis y evaluación de actividad antibacteriana / Phytochemical study of Uncaria guianensis leaves and antibacterial activity evaluation

Del extracto de éter de petróleo de hojas de Uncaria guianensis (Rubiaceae), se aisló un compuesto tipo clorina denominado éster etílico de feoforbida a y una mezcla de esteroles conocidos como ß-sitosterol y estigmasterol. Sus estructuras fueron elucidadas por análisis detallado de RMN, incluyendo técnicas bidimensionales, y por comparación con datos reportados en la literatura. Posteriormente, se evaluó la actividad antibacteriana al éster etílico de feoforbida a contra dos cepas Gram(+): S. aureus ATCC 6538 y E. faecalis ATCC 29212 y contra tres cepas Gram (-): E. coli ATCC 25922, S. typhimurium ATCC 14028s y S. typhimurium MS7953. Se encontró actividad significativa contra S. aureus, E. faecalis, E. coli y S. tiphymurium MS7953.

A chlorin compound, pheophorbide a ethyl ester and a mixture of sterols known as ß-sitosterol and stigmasterol, were isolated from the petroleum ether extract of Uncaria guianensis (Rubiaceae) leaves. Their structures were elucidated by detailed analysis of NMR spectra, including bidimensional techniques and by comparison with literature data. The antibacterial activity for the pheophorbide a ethyl ester was evaluated against two Gram (+) strains: S. aureus ATCC 6538 y E. faecalis ATCC 29212 and three Gram (-) strains: E. coli ATCC 25922, S. typhimurium ATCC 14028s y S. typhimurium MS7953S. aureus ATCC 6538 and E. fecalis ATCC 29212, finding significant activity against S. aureus 6538, E. faecalis 29212, S. tiphymurium MS7953 and E. coli 25922.

Actividad funcional de anticuerpos inducidos por péptido-miméticos derivados del antígeno MSP-2 del Plasmodium, como potenciales agentes inmunoterapéuticos en malaria causada por Plasmodium yoelii y Plasmodium berghei en ratones BALB/c / Functional activity of antibodies induced by peptido-mimetics derived from the Plasmodium MSP-2 antigen, as potential immuno-therapeutic agents in rodent malaria induced by P. berghei and P. yoelii strains

Teniendo en cuenta el alto grado de conservación genética de los residuos críticos de la estructura primaria del péptido 4044 (21KNESKYSNTFINNAYNMSIR40) identificado como crucial en el antígeno MSP-2 para que el Plasmodium falciparum pueda unirse con alta capacidad específica a glóbulos rojos y causar malaria, se diseñaron y sintetizaron dos secuencias en formas monomérica y polimérica de péptido-miméticos denominados pseudopéptidos amida reducida en las cuales se sustituyó un enlace peptídico normal por su isóstero ψ[CH2-NH] entre los residuos fenilalanina-isoleucina y entre los residuos isoleucina-asparagina, para dar lugar a los pseudopéptidos codificados ψ-128 forma monomérica (ψ-129 forma polimérica) y ψ-130 forma monomérica (ψ-131 forma polimérica). Con estos péptido-miméticos se generaron anticuerpos monoclonales de isotipo IgM. Mediante experimentos controlados de inmunización in vitro se indujo el cambio isotipo de los clones reactivos a las subclases IgG1, IgG2a, IgG2b e IgG3. Estas inmunoglobulinas se ensayaron por su actividad funcional antimalárica in vivo mostrando una alta eficacia en el control de la infección por malaria al ser administradas por transferencia pasiva. El efecto neutralizador del desarrollo biológico del patógeno por parte de estos anticuerpos inducidos de manera sitio-dirigida los hacen potencialmente útiles, como una potencial herramienta para el control de la infección por malaria.

Bearing in mind the high degree of genetical conservation of critical binding residues from the primary structure of the peptide 4044 (21KNESKYSNTFINNAYNMSIR40), which was previously identified as being crucial for the MSP-2 antigen to lead Plasmodium falciparum to bind red blood cells with high specific capacity, and so causing malaria, two peptido-mimetics so-named reduced amide pseudopeptides, in which a nature-made amide bond was replaced with a ψ[CH2-NH] methylene amide isoster bond, one between the Phe-Ile aminoacid pair and the second between Ile-Asn, were designed and synthesized in a site-directed manner as monomer and polymer forms, and were coded as ψ-128 for the monomer (ψ-129 polymer) and ψ-130 for the monomer (ψ-131 for polymer) respectively. These peptido-mimetics were used to produce monoclonal antibodies which displayed in both cases IgM isotype. By controlled in vitro immunization experiments their parent reactive hybridomas were induced to a Ig isotype-switching to IgG1, IgG2a, IgG2b and Ig3 sub-classes. These immunoglobulins were tested for their in vivo functional activity against malaria, showing a high efficacy property for controlling the malaria infection when passively transferred into BALB/c mice. The neutralizing effect of these site-directed designed antibodies on the Plasmodium biological development, make them a potential tool for the control of malaria.

Evaluación del efecto in vitro de anticuerpos inducidos por péptido-miméticos derivados del antígeno de superficie de merozoito-2 de plasmodium en malaria causada por plasmodium yoelii y plasmodium berghei en ratones BALB/c / Assessment of the in vitro effect of antibodies induced by peptido-mimetics derived from the Plasmodium merozoite surface protein-2 in malaria caused by P. berghei and P. yoelii in BALB/c mice

Con base en estudios realizados previamente en los cuales se identificaron los residuos críticos para la unión de la secuencia 21KNESKYSNTFINNAYNMSIR40 del antígeno MSP-2 del Plasmodium falciparum, se diseñaron y sintetizaron dos secuencias de pseudopéptidos amida reducida en las cuales se sustituyó un enlace peptídico normal por su isóstero ψ[CH2-NH] entre los residuos fenilalanina-isoleucina y entre los residuos isoleucina-asparagina, para dar lugar a los análogos codificados ψ-128 (forma monomérica), ψ-129 (forma polimérica), ψ-130 (forma monomérica) y ψ-131 (forma polimérica). Con los péptido-miméticos obtenidos en forma de polímero se inmunizaron ratones BALB/c para generar anticuerpos monoclonales que presentaron isotipo IgM. Mediante ensayos controlados de inmunización in vitro se indujo el cambio isotipo de los clones reactivos aislados de los hibridomas obtenidos de manera reproducible. Las inmunoglobulinas aisladas se ensayaron por su capacidad funcional neutralizadora de la infección controlada in vitro de cepas de Plasmodium de roedores a glóbulos rojos. Los resultados obtenidos evidencian el papel que pueden tener los anticuerpos inducidos por péptido-miméticos Plasmodium en ensayos de infección realizados en modelos animales de experimentación.

Based on previous studies in which those residues being critical for Plasmodium falciparum binding to red blood cells (RBCs) through the antigenic sequence (21KNESKYSNTFINNAYNMSIR40) from the merozoite surface antigen-2 (MSP-2) were identified, we have designed and synthesized two reduced amide pseudopeptide sequences based on the 31IN32 binding motif. Synthesized peptidomimetics, possess each one a modified peptide bond that presented as a ψ[CH2-NH] reduced amide isoster bond, to allowing the Phe-Ile modified aminoacid pair allowing pseudopeptides coded ψ-128 (monomer form) and ψ-129 (polymer form) and the Ile-Asn modified aminoacid pair for pseudopeptides coded ψ-130 (monomer form) and ψ-131 (polymer form). By using the polymer forms of both peptido-mimetics as immunogens, monoclonal antibodies were produced in BALB/c mice. These Ig showed an IgM isotype. The isotype antibody switching was lead by in vitro immunization of the original hybridomas. Isolated immunoglobulins were tested for their functional in vitro activity, on a infection controlled experiment of rodent Plasmodium strains infecting red blood cells. Obtained results reveal the role played by antibodies to peptido-mimetic in infection assays performed further on animal experimental models.

Fundamentos de criopreservación / Basic points in cryopreservation

El entender y aplicar adecuadamente la criopreservación de material biológico es fundamental en laboratorios y bancos de células. Sin embargo, aunque se han implementado protocolos para criopreservación, aún no se tienen los ideales en la mayoría de los casos. El objetivo de esta revisión es dar a conocer ciertos parámetros inherentes al proceso de criopreservación y la importancia de conocer ciertas características de la célula que pueden incidir con la viabilidad del producto congelado para lograr la técnica adecuada. Para alcanzar este propósito, el documento se basará en el conocimiento de las propiedades fisicoquímicas de la célula y/o el tejido, pues este proceso es afectado por diferentes variables como permeabilidad celular, volumen osmóticamente inactivo y relación superficie/área de la célula, la cual es variable de acuerdo a la especie, tipo y estadio de la célula a congelar. La estructura y composición de las membranas plasmáticas determinan los principales eventos celulares que tienen lugar durante los procesos de criopreservación; las bajas temperaturas afectan la difusión y ósmosis a través de las membranas y cada célula maneja su propio perfil biofísico el cual interactúa con diferentes criopreservantes celulares. El hallar el protocolo adecuado será lo que garantice la viabilidad y funcionabilidad celular.

Deteccion de metaloproteinasas en cancer gastrico y tejido normal mediante cimografia / Metalloproteinases were investigated in biopses from normal and tumoral tissues in patientes with gastric cancer

Las metaloproteinasas de matriz (MP) son un grupo de enzimas que han sido implicadas en el crecimiento, la invasion y las metastasis de varios canceres gastrointestinales, entre ellos el cancer gastrico (CG). Hasta el momento, no se ha demostrado relacion definitiva entre la actividad enzimatica y las condiciones clinicas del paciente. En este trabajo, se investigo la actividad de las metaloproteinasas en tejido tumoral y normal en pacientes con cancer gastrico. 54 muestras de 27 casos fueron estudiadas, con edad promedio de 60 años, 18 hombres y 9 mujeres; los tipos histologicos fueron: intestinal, 52 por ciento; difuso, 26 por ciento; y pobremente diferenciado, 22 por ciento. Una significativa actividad de MP fue encontrada en tejido tumoral vs. tejido normal: MP2 (colagenasa IV 72 Kda) 74 por ciento vs. 11 por ciento (p<0,0001) y MP9 (colagenasa IV 92 Kda) 78 por ciento vs. 15 por ciento (p<0,0001), respectivamente. No se observaron diferencias significativas entre la actividad de MP y las condiciones clinicas o los resultados de laboratorio. Conclusiones: estos hallazgos corroboran la significativa actividad de las metaloproteinasas en el tejido tumoral gastrico. Estas enzimas pueden estar involucradas en el comportamiento agresivo de estos canceres, independientemente del tipo histologico

Actividad in vitro de péptidos antimicrobianos sintéticos en cepas de S. Mutans / In vitro activity of antimicrobial synthetic peptides against S. Mutans strains

El propósito de este estudio fue identificar la actividad inhibitoria in vitro de péptidos antimicrobianos sintéticos sobre el Streptococcus mutans y comparar los resultados con la actividad ejercida por la clorhexidina al 0.2/100 diluida, la kanamicina, la ampicilina y la tetraciclina, actuando como controles positivos y PBS (sustancia buffer) como control negativo. Se realizó un estudio descriptivo, comparativo, de diseño experimental, con una población de 25 péptidos antimicrobianos sintéticos y 5 cepas de S. mutans: una cepa de AATCC, UAB3084 serotipo, e y 4 cepas aisladas de placa bacteriana de pacientes. Los péptidos, la clorhexidina y los antibióticos fueron sembrados en las 5 cepas incubadas a 370C durante 48 horas, y se observaron y midieron los halos de inhibición en milímetros de diámetro. Del 80/100 de los péptidos que inhibieron al S. mutans, los péptidos No. 20 y 11 fueron los mas eficaces. La clorhexidina en la concentración utilizada no inhibió al S. mutans y de los antibióticos, solo la kanamicina inhibió débilmente al microorganismo.